Importance de l'activité spécifique dans l'isolement des protéines

L'activité spécifique est un terme utilisé pour mesurer la vitesse de réaction d'une enzyme avec un substrat.

L'activité enzymatique spécifique (activité spécifique en abrégé) est une mesure de la pureté enzymatique et est exprimée en unités / mg . La valeur devient plus grande lorsqu'une préparation enzymatique devient plus pure puisque la quantité de protéine (mg) est généralement moindre, mais la vitesse de réaction reste la même (ou peut augmenter en raison de l'interférence réduite ou de l'élimination des inhibiteurs).

Activité spécifique: mesure de la cinétique enzymatique

En guise d'arrière-plan, les enzymes sont des protéines qui agissent comme catalyseurs en réduisant la quantité d'énergie d'activation nécessaire à la réaction. L'énergie d'activation est l'énergie nécessaire pour déclencher les réactions car de nombreuses réactions ne se produisent pas très rapidement (ou ne se produisent pas du tout) si elles sont thermodynamiquement possibles.

Les enzymes catalysent des réactions spécifiques dans un site particulier (connu sous le nom de site actif) où les réactifs se lient et réagissent pour générer les produits. Les substrats ont des sites actifs qui leur sont spécifiques, de sorte qu'aucune autre substance ne se lie ou ne réagit sur le même site. Comme une serrure et une clé, chaque enzyme catalysera seulement une réaction spécifique (avec quelques exceptions).

L'activité spécifique est utilisée dans les méthodes d'isolement des protéines pour indiquer le pourcentage de purification. Il est important de connaître cette unité lors de l'achat d'enzymes pour indiquer exactement la quantité d'enzyme pure que vous obtenez.

Lors de la mesure de la cinétique enzymatique (taux de réaction d'une enzyme avec un substrat ou une surface), l'activité spécifique est définie comme la quantité de substrat que l'enzyme convertit (réactions catalysées). mg de protéine dans la préparation enzymatique, par unité de temps.

Un exemple d'activité spécifique serait:

• L'activité spécifique de l'enzyme isolée a été mesurée à 150 umoles / min / mg de protéine avant purification et 800 umoles / min / mg, après purification.

L'activité spécifique est une mesure importante de la pureté des enzymes. Différents lots d'une enzyme pure doivent avoir les mêmes valeurs et même diluer une solution enzymatique plusieurs fois auront des valeurs d'activité spécifiques identiques même s'il y aura différentes valeurs d'activité enzymatique. En effet, dans le calcul de l'activité spécifique, le numérateur (unités / ml) et le dénominateur (mg / ml) sont affectés de manière égale.

L'activité spécifique est très différente de l'activité, mais le calcul de l'activité spécifique dépend toujours de la valeur de l'activité. Cela signifie que la valeur d'activité spécifique indiquée dépendra également de la définition de l'unité enzymatique.

Les lots d'enzymes dont la valeur d'activité spécifique est plus faible que prévu peuvent contenir des molécules d'enzymes qui se sont altérées ou mélangées à des impuretés.

Facteurs affectant l'activité enzymatique

Il est possible qu'une enzyme puisse avoir des valeurs d'activité mesurées différentes lorsqu'elle est mesurée dans différents laboratoires (c'est-à-dire des différences réelles d'activité mesurées et non des différences apparentes).

La façon dont un test est effectué (la méthode de test pour déterminer la pureté des enzymes) influencera les valeurs d'activité rapportées. Par exemple, les enzymes sont généralement plus actives entre des températures de 37 degrés Celsius et 20 degrés Celsius, donc si un test est effectué à 21 degrés Celsius, les valeurs seront différentes des analyses effectuées à une température de 32 degrés Celsius (typiquement , les essais sont effectués à une température comprise entre 20 et 37 degrés Celsius).

Ainsi, la définition de l'unité d'enzyme serait mieux exprimée comme: 1 unité (U) est la quantité d'enzyme qui catalyse la réaction de 1 nmol de substrat par minute dans des conditions standard.