Comment faire tampon TBE en 3 étapes faciles

Le tampon TBE est une solution tampon composée de Tris base, d'acide borique et d'EDTA (ou Tris-borate-EDTA tout à fait). Ce tampon est souvent utilisé pour l'électrophorèse sur gel d'agarose dans l'analyse de produits d'ADN résultant de l'amplification par PCR, de protocoles de purification d'ADN ou d'expériences de clonage d'ADN.

Le tampon TBE est particulièrement utile pour la séparation de plus petits fragments d'ADN (PM <1000), tels que de petits produits de digestion par des enzymes de restriction.

TBE a une plus grande capacité tampon et donnera une résolution plus nette que le tampon TAE. Le tampon TAE est une solution composée de base Tris, d'acide acétique et d'EDTA (Tris-acétate-EDTA).

TBE est généralement plus cher que TAE et inhibe l'ADN ligase, ce qui peut poser des problèmes si les étapes ultérieures de purification de l'ADN et de ligation sont prévues. Avec les trois étapes simples qui suivent, apprenez comment créer un tampon TBE. Cela ne devrait pas prendre plus de 30 minutes pour créer ce tampon. Voici comment:

Préparer une solution mère d'EDTA

Une solution d'EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique) doit être préparée à l'avance. L'EDTA ne se dissout pas complètement jusqu'à ce que le pH soit ajusté à environ 8,0. Pour une solution mère de 500 ml d'EDTA 0,5 M, pesez 93,5 grammes de sel disodique EDTA (FW = 372,2). Puis le dissoudre dans 400 millilitres d'eau déminéralisée et ajuster le pH avec du NaOH. Après cela, compléter la solution à un volume final de 500 millilitres.

Préparer une solution mère de TBE

Préparer une solution mère concentrée (5x) de TBE en pesant 54 g de base Tris (FW = 121. 14) et 27. 5 g d'acide borique (FW = 61. 83) et en dissolvant les deux dans environ 900 millilitres d'eau déminéralisée. Puis ajouter 20 millilitres d'EDTA 0,5 M (pH 8,0) et ajuster la solution à un volume final de 1 litre.

Cette solution peut être stockée à température ambiante mais un précipité se forme dans les solutions plus anciennes. Conserver le tampon dans des bouteilles en verre et jeter si un précipité s'est formé.

Préparer une solution de travail de TBE

Pour l'électrophorèse sur gel d'agarose, un tampon TBE peut être utilisé à une concentration de 0,5x (dilution 1: 10 de la solution concentrée). Diluer la solution mère de 10x dans de l'eau déminéralisée. Les concentrations finales de soluté sont Tris-borate 45 mM et EDTA 1 mM. Le tampon est maintenant prêt pour l'utilisation d'un gel d'agarose.

Ce dont vous avez besoin

Pour fabriquer un tampon TBE, vous n'avez besoin que de quatre substances. Les autres éléments de cette liste sont l'équipement. Les quatre substances requises sont le sel disodique EDTA, la base Tris, l'acide borique et l'eau désionisée.

En ce qui concerne l'équipement, vous aurez besoin d'un pH-mètre et de normes d'étalonnage, selon le cas. En plus de cela, vous aurez besoin de béchers ou flacons de 600 millilitres et 1500 millilitres. Pour compléter vos besoins en équipement, vous trouverez des cylindres gradués, des barres d'agitation et des plaques d'agitation.

Vérifiez l'inventaire dans le laboratoire que vous utiliserez pour vous assurer que vous avez tout ce dont vous avez besoin avant de commencer. Rien n'est pire que d'avoir à arrêter au milieu de la préparation d'une solution parce que vous êtes à court de matériaux appropriés.

Si votre laboratoire est à l'école ou sur votre lieu de travail, vérifiez avec le personnel approprié qu'il a tous les articles dans le stock. Cela pourrait vous faire gagner du temps et de l'énergie à la fin.