Vidéo: Comment préparer une solution 2025
Le tampon TAE est une solution composée de Tris base, d'acide acétique et d'EDTA (Tris-acétate-EDTA). Il est historiquement le tampon le plus couramment utilisé pour l'électrophorèse sur gel d'agarose dans les analyses de produits d'ADN résultant de l'amplification par PCR, de protocoles de purification d'ADN ou d'expériences de clonage d'ADN.
Ce tampon a une faible force ionique et une faible capacité tampon. Il est mieux adapté à l'électrophorèse de grandes pièces d'ADN (> 20 kb) et devra être remplacé fréquemment ou recirculé pendant des durées de gel plus longues (> 4 h).
Dans cet esprit, vous pouvez envisager plusieurs lots du tampon.
Étant donné que le tampon est facile à fabriquer et que les étapes peuvent être effectuées rapidement, il ne devrait pas être fastidieux de retirer plus d'un lot à la fois. En utilisant les instructions ci-dessous, cela ne devrait prendre que 30 minutes pour fabriquer le tampon TAE. Voici comment:
Préparer une solution mère d'EDTA
Une solution d'EDTA (acide éthylène diamine tétra-acétique) est préparée à l'avance. L'EDTA ne va pas complètement dans une solution jusqu'à ce que le pH est ajusté à environ 8. 0. Pour une solution mère de 500 millilitres d'EDTA 0,5 M, pesez 93,5 grammes de sel disodique EDTA (FW = 372). ). Dissoudre dans de l'eau déminéralisée de 400 millilitres et ajuster le pH avec de l'hydroxyde de sodium (NaOH). Compléter la solution à un volume final de 500 millilitres.
Fouetter une solution mère de TAE
Préparer une solution concentrée (50x) de TAE en pesant 242 grammes de base Tris (FW = 121. 14) et la dissoudre dans environ 750 millilitres d'eau déminéralisée.
Ajouter soigneusement 57. 1 millilitre d'acide glacial et 100 millilitres d'EDTA 0,5 M (pH 8,0). Après cela, ajuster la solution à un volume final de 1 litre. Cette solution mère peut être stockée à température ambiante. Le pH de ce tampon n'est pas ajusté et devrait être d'environ 8. 5.
Préparer une solution de travail de TAE
La solution de travail du tampon TAE 1x est faite en diluant simplement la solution mère de 50x dans de l'eau désionisée.
Les concentrations finales de soluté sont de 40 mM. Tris acétate et EDTA 1 mM. Le tampon est maintenant prêt pour l'utilisation d'un gel d'agarose.
Ce dont vous avez besoin pour le tampon
Puisque la création du tampon TAE ne nécessite qu'un ensemble d'instructions rapide et simple, la quantité de matériel nécessaire n'est pas excessive. Vous aurez juste besoin de sel disodique EDTA, de base Tris et d'acide acétique glacial.
La fabrication du tampon nécessite également un pH-mètre et des étalons, selon le cas. Vous aurez également besoin de béchers ou de flacons de 600 millilitres et de 1500 millilitres ainsi que de cylindres gradués. Enfin, vous aurez besoin d'eau désionisée, de barres d'agitation et de plaques d'agitation.
Wrapping Up
Où prévoyez-vous de créer le tampon - sur un site d'école, un lieu de travail ou un autre lieu, comme votre domicile?Vérifiez l'inventaire avant de commencer à vous assurer que vous avez tous les documents ci-dessus pour le tampon TAE.
Si vous préférez ne pas avoir à payer pour du matériel, il est recommandé d'opter pour le tampon à l'extérieur de votre maison. Vous pouvez facilement commander le matériel dont vous avez besoin en ligne ou vous rendre dans un magasin spécialisé.
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