Comment lyophiliser une culture bactérienne (lyophilisation)

La lyophilisation ou cryodésiccation consiste à éliminer l'eau d'un produit après l'avoir congelé (puis placé sous vide), ce qui permet à la glace de passer du solide à la vapeur, sans passer par une phase liquide. La glace (ou d'autres solvants congelés) est éliminée d'un produit par le processus de sublimation et les molécules d'eau liées sont éliminées par le processus de désorption.

Les bases de la lyophilisation

L'une des meilleures façons de stocker une culture de bactéries, de champignons, de levures ou d'autres micro-organismes pendant de longues périodes est d'utiliser le procédé de lyophilisation. Cette courte procédure de laboratoire peut être réalisée avec n'importe quel lyophilisateur disponible dans le commerce qui préservera votre collection de culture. Parce que la lyophilisation est la forme de séchage la plus complexe et la plus coûteuse, le procédé est généralement limité à des matériaux délicats et thermosensibles de grande valeur. Les substances qui ne sont pas endommagées par le gel peuvent généralement être lyophilisées, de sorte que le stockage réfrigéré est inutile.

Ce processus peut prendre aussi peu que trois heures, et aussi longtemps que 24 heures, sans compter le temps de croissance de la culture.

Le processus étape par étape de lyophilisation

1. D'abord, cultiver une culture d'une nuit, ou la pelouse, du micro-organisme sur LB ou une autre gélose nutritive appropriée.

2. Ensuite, préparez des flacons de bouchon à sertir stériles en autoclave à l'avance, avec les bouchons (bouchons en caoutchouc) placés de manière lâche sur le dessus. Placez des étiquettes en papier imprimées avec l'identification de la culture dans les tubes avant l'autoclavage. Sinon, utilisez des tubes avec des bouchons conçus pour la stérilité.

3. Ajouter 4 ml de tampon de lyophilisation à la plaque. Si nécessaire, les cellules peuvent être suspendues à l'aide d'une tige de verre stérile.

4. Transférer rapidement la suspension de culture dans les flacons stérilisés. Ajouter environ 1,5 ml par flacon. Sceller avec le capuchon en caoutchouc.

5. Congelez la suspension de culture à l'intérieur des flacons en plaçant les flacons dans un congélateur à -20 degrés Celsius.

6. Une fois les cultures congelées, préparez le lyophilisateur en le tournant et en laissant suffisamment de temps pour que les conditions de température et de vide appropriées se stabilisent. Pour ce faire, suivez les instructions du fabricant pour la marque particulière de lyophilisateur que vous utilisez.

7. Soigneusement et aseptiquement, placez les bouchons des flacons sur les flacons afin que l'humidité puisse s'échapper pendant le processus de lyophilisation et placez les flacons dans une chambre de lyophilisation. Appliquer le vide à la chambre selon les instructions du fabricant.

8. Laisser le temps de culture se lyophiliser complètement (sécher). Cela peut prendre de quelques heures à une nuit en fonction du volume de chaque échantillon et combien d'échantillons vous avez.

9. Retirer les échantillons de la chambre du lyophilisateur conformément aux instructions du fabricant et sceller immédiatement les flacons avec les bouchons en caoutchouc, puis les couvercles à sertir.

10. Conserver la collection de culture lyophilisée à température ambiante.

Produits dont vous aurez besoin

• Lyophilisateur
• Nutriments ou autres plaques d'agar appropriées (et incubateur pour faire pousser la culture)
• Baguette de verre
• Tampon de lyophilisation
• Flacons à sertir avec bouchons en caoutchouc (et une pince à sertir pour appliquer les bouchons)
• Congélateur

_{Référence:
SP Scientific. Principes de base de la lyophilisation. // www. spscientific. com / lyophilisation-bases /}