Comment préparer une solution saline tamponnée au phosphate (PBS)

PBS (solution saline tamponnée au phosphate) est un tampon couramment utilisé pour la coloration immunohistochimique et est couramment utilisé dans la recherche biologique. L'osmolarité et les concentrations ioniques des solutions correspondent à celles du corps humain (isotonique).

Le PBS est une solution saline à base aqueuse contenant de l'hydrogénophosphate de sodium, du chlorure de sodium et, dans certains cas, du chlorure de potassium et du dihydrogénophosphate de potassium.

Coloration immunofluorescente pour IHC

La coloration immunofluorescente a été la première méthode de coloration immunohistochimique (IHC). Avec la fondamentalité de la réaction de liaison antigène-anticorps, les antigènes deviennent visibles en utilisant des colorants de fluorescence lorsqu'ils sont conjugués avec des anticorps. Le processus se produit lorsqu'il est activé en excitant la lumière d'une longueur d'onde spécifique sous un microscope à fluorescence. L'immunohistochimie désigne le procédé de détection d'antigènes (par exemple, des protéines) dans les cellules d'une coupe tissulaire en utilisant le principe des anticorps se liant spécifiquement aux antigènes dans les tissus biologiques.

Utilisations de la solution saline tamponnée au phosphate (PBS)

La solution saline tamponnée au phosphate a de nombreuses utilisations car elle est isotonique et non toxique pour la plupart des cellules. Il peut être utilisé pour diluer des substances et est utilisé pour rincer les récipients contenant des cellules. Le PBS peut être utilisé comme diluant dans les méthodes de séchage des biomolécules parce que les molécules d'eau à l'intérieur de celui-ci seront structurées autour de la substance (protéine, par exemple) pour être «séchées» et immobilisées sur une surface solide.

La fine pellicule d'eau qui se lie à la substance empêche la dénaturation ou d'autres changements conformationnels. Les tampons de carbonate peuvent être utilisés dans le même but mais avec moins d'efficacité. Le PBS peut également être utilisé pour prendre un spectre de référence lors de la mesure de l'adsorption de protéines en ellipsométrie.

Préparation du PBS

Il existe plusieurs façons de préparer le PBS.

Certaines formules ne contiennent pas de potassium, alors que d'autres contiennent du calcium ou du magnésium. La recette de tampon ci-dessous, qui est relativement facile, est pour la solution mère PBS 10X (0,1 M). Une option pour ajouter Tween est également fournie. L'ensemble du processus prend environ 10 minutes.

Comment préparer une solution saline tamponnée au phosphate (PBS)

1. Peser ce qui suit: 10. 9g de phosphate de sodium anhydre dibasique (Na2HPO4), 3. 2g de phosphate monosodique anhydre (NaH2PO4) et 90g de chlorure de sodium (NaCl).
2. Dissolvez tout ce qui précède dans un peu moins de 1 litre d'eau distillée.
3. Ajustez le pH à 7. 4.
4. Amenez la solution jusqu'à un volume final de 1L.
5. (facultatif) Pour une solution contenant 0,5% de Tween 20, ajouter 5 ml de Tween 20 à la solution 1L.
6. Diluer 10X avant utilisation et réajuster le pH si nécessaire.

Conseils pour fabriquer le tampon PBS

• Conserver à température ambiante.
• Les réactifs non anhydres peuvent être substitués, mais vous devrez recalculer la masse appropriée de chacun pour accommoder les molécules d'eau ajoutées.

Ce qu'il faut pour faire du tampon PBS

• Phosphate de sodium monobasique (anhydre)
• Phosphate de sodium dibasique (anhydre)
• Chlorure de sodium
• Échelle et bateaux de pesée
• Agitateur magnétique et barre d'agitation > Sonde de pH, calibrée, et solutions appropriées pour ajuster le pH
• Flacon volumétrique 1L
• Tween 20 (optionnel)